Гексокиназный метод определения глюкозы

Глюкозооксидазный и гексокиназный методы определения глюкозы в сыворотке в крови

Основным показателем углеводного обмена является глюкоза. Измерение сахара в крови помогает в определении различных заболеваний, в частности таких как сахарный диабет и всевозможные болезни крови. Чтобы предотвратить многие недуги врачи рекомендуют держать уровень глюкозы в пределах нормы.

Методы

Есть несколько методов, которые могут быстро измерить уровень сахара в крови. Наиболее популярными считаются:

  • Ферментативный;
  • Гексокиназный метод.

https://www.youtube.com/watch?v=ytcopyrightru

Раньше использовались также редуктометрический и колорометрический, но из-за токсичности и низкой точности они больше не используются в современной медицине.

Ферментивный метод определения глюкозы в крови условно делится на:

  • глюкозооксидазный
  • гексокиназный

Определение глюкозы в крови глюкозооксидазным методом используется еще с начала века.Он популярен тем, что использует ферменты для получения результата. То есть, основывается на реакции окисления глюкозы в крови или моче. А также по результатам с использованием плазмы крови.

Простота метода заключается также в том, что результат очень быстро можно получить при помощи биохимического фотометра, так и автоматическим анализатором.Такой метод специалисты считают наиболее точным, а для анализа необходима кровь или сыворотка крови.

У него также есть некоторые недостатки: во время анализа, перекись водорода, которая образуется от синтеза, может значительно занижать результаты глюкозы.

Поэтому такой метод считают линейным, с ошибкой в 30ммоль/л.

Гексокиназный метод

Такой метод считают референтным по измерению уровня глюкозы в крови, но наиболее точным, так как не взаимодействует с компонентами сыворотки крови. Чаще всего этот метод используют в эндокринологических отделениях.Сотрудники лаборатории могут предложить способы проведения такого анализа:

  • провести обследование при помощи автоматического биохимического анализатора;
  • автоматический фотометр, который используют в небольших лабораториях;
  • в экстренных ситуациях удобным будет карманный глюкометр (One Touch).

Гексокиназный метод определения глюкозы

Достаточно быстро можно определить уровень глюкозы в крови каждого человека.

При помощи портативных глюкометров и быстрым биохимическим анализом в лаборатории.

Проводить анализ крови можно в лаборатории или в домашних условиях. Почти все методы лабораторных анализов предполагают забор крови из вены или пальца. И хоть данный анализ не требует специальной подготовки. Есть факторы, которые могут повлиять на результаты:

  • Сильная физическая нагрузка накануне сдачи анализа.
  • Сильное эмоциональное потрясение.
  • Переедание или чрезмерное употребление алкогольных напитков.
  • Также стоит помнить о том, что не следует перед анализом крови 2-3 дня использовать лекарственные препараты.

Если кровь для анализа берут из вены, делать это нужно утром, натощак.

Если же для анализа используют кровь из пальца, ее забор можно совершать в любое время суток.На качество лабораторного исследования могут влиять такие факторы:

  • время забора крови;
  • материал пробирок или качество системы для забора крови;
  • положение тела пациента;
  • квалификация медицинских сотрудников.

ИНСТРУКЦИЯ

поприменению набора реагентов дляколичественного определения содержанияглюкозы в сыворотке и плазме кровичеловека глюкозооксидазным методом

«ГЛЮКОЗА- UTS»

Набор«ГЛЮКОЗА – UTS»разрешен кпроизводству, продаже и применению натерритории РФ.

https://www.youtube.com/watch?v=ytdevru

Регистрационноеудостоверение № ФСР 2009/05457

Информация длязаказа набора «ГЛЮКОЗА – UTS»

Кат. № Комплектация Количество определений
ГЛ-09-004-100 реагент 100 мл калибратор 1 мл 100/v
ГЛ-09-004-400 реагент 400 мл калибратор 4 мл 400/v

гдеv– объем фотометрической ячейкианализатора.

1.НАЗНАЧЕНИЕ

1.1.Набор реагентов «ГЛЮКОЗА- UTS» предназначендля определения концентрации глюкозыв сыворотке и плазме крови человека вклинико-диагностических и биохимическихлабораториях для целей диагностикизаболеваний и контроля проводимоголечения пациентов.

1.2.Глюкоза является одним из важнейшихкомпонентов крови, ее количество отражаетсостояние углеводного обмена. глюкозы в крови повышается присахарном диабете, эпидемическомэнцефалите, повышении гормональнойактивности щитовидной железы и т.д. Наэтом основано клиническое значениеанализа.

1.3.Потенциальный риск применения набора– класс 2а.

Для снижения указанного рисканеобходимо в каждой аналитической серииконтролировать качество результатованализов с применением контрольныхсывороток в соответствии с ОСТ91500.13.0001-2003.

2.ПРИНЦИП МЕТОДА

2.1. Глюкозооксидазакатализирует окисление β-D-глюкозы собразованием эквимолярных количествглюконовой кислоты и перекиси водорода(1).

Перекись водорода под действиемпероксидазы в реакции с 4-аминоантипирини фенолом образует окрашенный продукт– хинонимин (2), интенсивность окраскикоторого пропорциональна концентрацииглюкозы в анализируемом образце иизмеряется фотометрически при длиневолны 505 (490-550) нм [1,2].

β-D-Глюкоза H2O O2 Глюкозооксидаза Глюконовая кислота Н2О2(1)

2Н2О2 4-аминоантипирин Фенол ПероксидазаХинонимин 4Н2О (2)

2.2.Фотометрическое измерение основано наналичии пика поглощения с максимумомпри длине волны 505 нм молекуламихинонимина. Все остальные компонентыреакционной смеси слабо поглощают светпри этой длине волны. Таким образом,увеличение оптической плотностиреакционной смеси пропорциональноинтенсивности окраски хинонимина и,следовательно, прямо пропорциональноконцентрации глюкозыв пробе.

3.СОСТАВ НАБОРА

3.1.Набор реагентов «ГЛЮКОЗА- UTS» поставляетсяв виде двух растворов: Реагента икалибратора.

Наименование Состав Концентрация
Реагент Фосфатный буфер, pH 7,5ФенолГлюкозооксидазаПероксидаза4-аминоантипирин 100 ммоль/л5 ммоль/л{amp}gt;10 000 MЕ/л{amp}gt;2 000 MЕ/л0,5 ммоль/л
Калибратор Водный раствор глюкозы 5,55 ммоль/л

4.1.Набор обеспечивает линейную областьопределения концентрации глюкозыв диапазоне от 0,5 до 25 ммоль/л, отклонениеот линейности не превышает 2,5%.

4.2. Чувствительность– не более 0,5 ммоль/л

4.3. Воспроизводимость- коэффициент вариации результатовопределений – не более 2,5%.

4.4.Качество набора можно оценивать поотечественным или зарубежным контрольнымсывороткам, аттестованным глюкозооксидазнымметодом.

4.6.Нормальные величины концентрацииглюкозыв сыворотке или плазме взрослого человекасоставляют 4,1-5,9 ммоль/л [3].

4.7.Перечень лекарственных препаратов,влияющих на определение концентрацииглюкозы,приведены в обзоре [4].

5.1.Реагентсодержит фенол и 4-аминоантипирин.Следует избегать попадания этих реагентовна кожу и слизистые. В случае попаданияих на кожу и слизистые оболочки необходимопромыть поражённые участки большимколичеством проточной воды.

5.2.  Привыполнении лабораторного исследованиянеобходимо соблюдать «Правила устройства,техники безопасности, производственнойсанитарии, противоэпидемического режимаи личной гигиены при работе в лабораториях(отделениях, отделах) санитарно-эпидемиологическихучреждений системы Министерстваздравоохранения СССР» (Москва, 1981 г.).

5.3.При работе с биологическими пробамиследует надевать одноразовые резиновыеили пластиковые перчатки, т.к. образцыкрови человека следует рассматриватькак потенциально инфицированные,способные длительное время сохранятьи передавать ВИЧ, вирусы гепатита илилюбой другой возбудитель вируснойинфекции.

Для выполнения анализа по определениюконцентрации глюкозыс применением набора реагентов «ГЛЮКОЗА– UTS»рекомендуется использовать фотометр,фотоэлектроколориметр, полуавтоматическийили автоматический биохимическийанализаторы, позволяющие выполнятьизмерение поглощения оптическойплотности при длине волны 505 (490-550) нм(режим по конечной точке), и обеспечивающиетермостатирование фотометрическойячейки при температуре

(37±0,5)ОС.

6.2. Общелабораторноеоборудование.

https://www.youtube.com/watch?v=https:accounts.google.comServiceLogin

7.1. Негемолизированнаясыворотка или плазма крови.

7.2. Сыворотку илиплазму крови следует отделить отформенных элементов крови немедленнопосле взятия крови.

7.3.Для замедления гликолиза и предотвращениясвертывания при заборе крови использоватьпробирки, содержащие антикоагулянтфторид натрия.

7.4.Образцы сыворотки или плазмы дляпроведения анализа на содержание глюкозыстабильны не более 3-х суток при (2-8) ОС[3].

8.1. Реагент икалибратор готовы к использованию.

8.2.Проведениеручного анализа с использованиемфотометра или фотоэлектроколориметра.

Анализируемая проба, мкл Калибровочная проба, мкл
Реагент 1000 1000 1000
Калибратор 10
H2O 10
Сыворотка или плазма крови 10

8.4.Пробы тщательно перемешать и инкубироватьпри температуре (37±0,5) ОСв течение 5 минут или при комнатнойтемпературе ( 18… 25 ОС)в течение 10 минут.

8.5.Измерить оптическую плотностьанализируемой пробы и калибровочнойпробы против холостой пробы в оптическойкювете при длине волны 505 (490-550) нм. Окраскараствора стабильна в течение 30 минут.

где: С – концентрация глюкозы в анализируемомобразце сыворотки или плазмы в моль/л;

Акал–оптическая плотность калибровочнойпробы отн. холостой пробы, ед. опт. плотн.;

Cкал–концентрация глюкозы в калибраторе,равная 5,55 ммоль/л.

https://www.youtube.com/watch?v=ytpolicyandsafetyru

8.6. Если полученнаяконцентрация глюкозы в образце выше25 ммоль/л, то исследование следуетповторить: разбавить анализируемыйобразец 0,9% раствором NaCl в соотношении1:1 и полученный результат определенияумножить на 2.

Наименование параметра Значение
Метод измерения Конечная точка
Длина волны, нм Основная 505 (490-550), дифференциальная 600
Измерение против дист. вода
Температура реакции 37 ОС
Единица измерения ммоль/л
Число знаков после запятой 2
Изменение оптической плотности Увеличивается
Соотношение реагент/проба 100:1
Концентрация калибратора, ммоль/л 5,55
Время реакции, мин 5 (37 ОС)
Верхний предел абсорбции реагента против воды, ед. опт. плот. 0,3
Нижний предел абсорбции реагента против воды, ед. опт. плот. 0
Границы линейности, ммоль/л 0,5-25
Максимум нормы, ммоль/л 5,9
Минимум нормы, ммоль/л 4,1
Гликемия, ммоль/л 4,5 6 8 10 12 14 17 19
HbAIc, % 5 6 7 8 9 10 11 12

В норме содержание HbAIc в крови составляет 5- 7% от общего уровня гемоглобина. У 6% лиц, не болеющих сахарным диабетом, выявляется повышение уровня гликозилированного гемоглобина. Уровни HbAIc, свидетельствующие о качестве компенсации заболевания при инсулинотерапии, представлены в табл. Гемоглобин HbAIc является самой важной подгруппой фракции гемоглобина НвА1, состоящей из 3 компонентов ( Уровни гликозилированного гемоглобина НвА1 в крови на 1,5-2% выше, чем HbAIc. У больных с хорошей компенсацией сахарного диабета он находится в пределах 8,5-11%. На показатель гликозилированного гемоглобина могут влиять такие патологические состояния, как анемия, полицитемия, гемоглобинопатии.

Понравилась статья? Поделиться с друзьями:
Медицинский словарик
Adblock detector